وسام أبو عمره
28-04-2005, 10:59 AM
صبغ البكتريا
لكي نسطيع مشاهدة البكتريا تحت المجهر لا بد من صبغها لأنها كائنات شفافة ولا يمكن تمييزها عن الوسط المحيط بها . وقبل أن اتحدث عن عملية الصبغ لا بد من القيام بعملية مهمة جداً وهي عملية تثبيت الغشاء البكتيري ويتم ذلك بأخذ شريحة وتعقيمها وذلك بإمرارها عبر اللهب المباشر بسرعة وخفة والتأكد من وجود بقع دهنية عالقة بها حتى تكون الشريحة واضحة .نبدأ بأخذ قطرة ماء ثم نأذخ بكتريا من آجار مائل بواسطة ابرة تلقيح ونفرد المعلق البكتيري (من البكتريا والماء) فوق الشريحة برفق بواسطة ابرة التلقيح او عود خشبي ونجففها بواسطة اللهب المباشر مع ترك مسافة 20 سم حتى يجف الغشاء وبالتالي نكون قد انتهينا من عملية التثبيت والهدف منها هو قتل الخلايا البكتيرية لأن الخلايا البكتيرية الحية لاتصبغ وأيضا الصاق الخلايا البكتيرية بالشريحة حتى لا تزول عند الغسيل من الصبغ.
الصبغ نوعان صبغ موجب وهو الذي يتم فيه صبغ الخلاياالبكتيرية وترك الوسط المحيط بها دون صبغ والنوع الآخر هو صبغ سالب ويتم فيه صبغ الوسط المحيط وترك الخلايا البكتيرية دون صبغ.
والصبغ البسيط هوأحد الأمثله على الصبغ الموجب وفيه : بعد تثبيت الغشاء البكتيري نحن مخيرين بين نوعين من الصبغات صبغة زرقاء وهي صبغة ازرق الميثيلين وصبغة حمراء هي السفرانين ولكن الفرق بينهما هو الوقت الذي نبقي فيه الصبغة على الشريحة فأزرق الميثيلين بعد فرده على الغشاء البكتيري نبقيه لمدة 3-5 دقائق ثم نغسله أما السفرانين فنبقيه لمدة نصف دقيقة على حسب تركيز الصبغة ثم نغسل ونجفف الشريحة على اللهب المباشر وبعد أن نتأكد من جفافها تماما توضع عليها قطرة من زيت السيدر وتفحص تحت المجهر بواسطة العدسة الزيتية
بالنسبة للصبغ السالب فإننا نستفيد منه في تحديد شكل الخلايا البكتيرية.
أما الصبغ السالب فإننا لا نحتاج لعملية تثبيت لمااااااااااااااااااااااااااااذا؟؟؟؟؟؟؟
نضع نقطة من المعلق البكتيري في نهاية طرف الشريحة ونضع عليها نقطة من صبغة النيجروسين السوداء ونفردها بواسطة شريحة أخرى توضع على الشريحة الأصلية بزاوية حادة وتسحب وتترك لتجف في جو المعمل
لكي نسطيع مشاهدة البكتريا تحت المجهر لا بد من صبغها لأنها كائنات شفافة ولا يمكن تمييزها عن الوسط المحيط بها . وقبل أن اتحدث عن عملية الصبغ لا بد من القيام بعملية مهمة جداً وهي عملية تثبيت الغشاء البكتيري ويتم ذلك بأخذ شريحة وتعقيمها وذلك بإمرارها عبر اللهب المباشر بسرعة وخفة والتأكد من وجود بقع دهنية عالقة بها حتى تكون الشريحة واضحة .نبدأ بأخذ قطرة ماء ثم نأذخ بكتريا من آجار مائل بواسطة ابرة تلقيح ونفرد المعلق البكتيري (من البكتريا والماء) فوق الشريحة برفق بواسطة ابرة التلقيح او عود خشبي ونجففها بواسطة اللهب المباشر مع ترك مسافة 20 سم حتى يجف الغشاء وبالتالي نكون قد انتهينا من عملية التثبيت والهدف منها هو قتل الخلايا البكتيرية لأن الخلايا البكتيرية الحية لاتصبغ وأيضا الصاق الخلايا البكتيرية بالشريحة حتى لا تزول عند الغسيل من الصبغ.
الصبغ نوعان صبغ موجب وهو الذي يتم فيه صبغ الخلاياالبكتيرية وترك الوسط المحيط بها دون صبغ والنوع الآخر هو صبغ سالب ويتم فيه صبغ الوسط المحيط وترك الخلايا البكتيرية دون صبغ.
والصبغ البسيط هوأحد الأمثله على الصبغ الموجب وفيه : بعد تثبيت الغشاء البكتيري نحن مخيرين بين نوعين من الصبغات صبغة زرقاء وهي صبغة ازرق الميثيلين وصبغة حمراء هي السفرانين ولكن الفرق بينهما هو الوقت الذي نبقي فيه الصبغة على الشريحة فأزرق الميثيلين بعد فرده على الغشاء البكتيري نبقيه لمدة 3-5 دقائق ثم نغسله أما السفرانين فنبقيه لمدة نصف دقيقة على حسب تركيز الصبغة ثم نغسل ونجفف الشريحة على اللهب المباشر وبعد أن نتأكد من جفافها تماما توضع عليها قطرة من زيت السيدر وتفحص تحت المجهر بواسطة العدسة الزيتية
بالنسبة للصبغ السالب فإننا نستفيد منه في تحديد شكل الخلايا البكتيرية.
أما الصبغ السالب فإننا لا نحتاج لعملية تثبيت لمااااااااااااااااااااااااااااذا؟؟؟؟؟؟؟
نضع نقطة من المعلق البكتيري في نهاية طرف الشريحة ونضع عليها نقطة من صبغة النيجروسين السوداء ونفردها بواسطة شريحة أخرى توضع على الشريحة الأصلية بزاوية حادة وتسحب وتترك لتجف في جو المعمل